【睫状神经营养因子对视神经不全损伤后长距离再生作用的探究】视神经不好怎么办

来源:培训总结 发布时间:2019-10-14 08:38:35 点击:

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AOD

AD

Ax

CNS

CNTF

DAB

dAx

F.VEP

GAP-43

HE

HRP

IHC

mAx

NTF

ON

PNS

PBS

RGC

rhCNTF

SC

SABC

TMB

TEM第三军医大学硕士学位论文英文缩写一览表英文名称averageopticaldensityareadensityunmyelinatedaxonCentralNervousSystemCiliaryNeurotrophicFactordiaminobenzidinedegenermingaxonFlashvisualevokedpotentialsGrowthAssociatedProtein43hematoxylineosinhorseradishperoxidaseImmunohistochemistrymyelinatedaxonNeurotrophicFactorOpticNervePeripheralNervousSystemphosphatebalancedsolutionRetinalGanglionCellrecombinanthumanCiliaryNeurotrophicFactorSuperiorColliculusstreptavidin--biotin-peroxidasecomplextetramethybenzidineTransmissionelectronmicroscope中文名称平均光密度面密度无髓鞘轴突中枢神经系统睫状神经营养因子二甲基联苯胺变性髓鞘轴突闪光视觉诱发电位生长相关蛋白苏木素伊红辣根过氧化物酶免疫组织化学髓鞘化轴突神经营养因子视神经周围神经系统磷酸盐缓冲溶液视网膜神经节细胞人重组睫状神经营养因子上丘生物素.亲和素.过氧化物酶复合物四甲基联苯胺透射电镜

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EffectsofCNTFontheLongDistanceRegenerationofAxons

withtheincompleteInjuryofOpticNerveinRats

Abstract

PurposeToevaluatetheeffectsofrecombinanthumanCiliaryNeurotrophicFactor(rhCNTF)onthe

Methodslongdistanceregenerationofaxonsandthefunctionalrecovery、撕tllthemoderateincompleteinjuryofopticnerve(ON)inrandomlyrats.AdultfemaleWistarratsweredividedintorhCNTF-treatedandcontrolgroups.Aftertheopticnerveofeachrighteyewascrushedbymicroforcepsfor10secondsat1.5mmbehindtheeyeball,rhCNTF(2

water(2

onug/2|l1)Wasinjectedintovitreouscavityintravitreousratswere

nerveoftreatedgroupwhiledistilledu1)wasdoneincontroll,2,4group.minjectionssacrificedwererepeatedrespectivelyonand8weeksafterinjury.The1,2,4,8and12weeksafterinjuryandthepathologychangesofoptic

wereobservedbylightandelectronmicroscope.Meanwhileweinvestigatedthenumberof

differentdistaltothesiteofregeneratinganddegeneratingaxonsatinjury.2.GAP-43

axoplasmicexpressionineachopticnervewasdetectedwithimmunohistochemistry.3.The

andtransportWasassessedbyanterogradelabelingwithhorseradishF.VEPexaminationswereperformedbefore,immediatelyperoxidase(uP,P).4.everytimepointafter

injury.ThedataswereanalyzedstatisticallywithSPSS.

axonsResults1.Acute

and2weeksafter

increasinglyinflammatoryscarreactionanddegenerationwereobservedonlinjury.Thefromformedininjuryareaandaxonsdegenerationthenumberofbecameinsevere4to12weeksafterinjuryandaxonsrhCNTF-treatedgroupweremorethanthatincontrolgroup.Plexiformregenerating

axonsatunmyelinatedfibersat8mmanddiffuseregrowing2mmdistaltoinjurysitewere

observedrespectivelyinrhCNTF・treated

GAP-43atthepositiondistaltogroupandcontrolgroup.2.TheexpressionsofinjurysiteinrhCNTF-treatedgroupwerehigherthanthat

nerveincontrolfrom4to12weeksaftertheopticinjury.3.Thelabeling

ondensitybyHRP4weeksafterdecreasedimmediatelyon1and2weeksandrecoveredobviously

injury.Therecovery

groupwere3ratiosofaxoplasmictransportinrhCNTF・treatedgroupandcontrol1.86%and12.87%respectively.TherearesignificantlydifferenceoftheHRPanterogradelabelingaxonsdensityinONandsuperiorcolliculusbetweenrhCNTF-treated2

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groupandcontrolgroupsOn4to12weeksafterinjury.(萨0.01).4.F-VEP

onindicatedthatthemeanlatencyrecoveredtothevaluebefore

obviouslyrecoveredoninjurythefirstweekandtheamplituderecoveryratioof

on4weeksaftertheinjury.Theamplitudewas50.35%inrhCNTF-treatedgroup,and30.84%incontrol

Conelusions

1.CNTFcall8weeksafterinjury0<0.01).effectivelyadvancethelongdistanceregenerationofaxonsandrestorationofvisualfunctionsbyactivatingtheregeneratingreaction,promotingtherecoveryofaxoplasmic

themoderateincompletetransport,andslowingunderwaydegenerationofnerveaxonsfollowinginjuryofopticinadultrats.’

2.It’SalsolimitedforCNTFtopromotetheregenerationofopticnerve.Manyfactorsinvolvedinthecomplicatedprocessofregenerationofopticnerve.ThecomprehensivetreatmentwillbemoreeffectivebyupregulatingtheintrinsicgrowthpotentialofRGCsandovercomingtheunfavorableextrinsicCNSenvironment.

KeyWords:opticnerve,incompleteinjury,CNTF,regeneration,GAP一43,HRP,F-VEP3

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睫状神经营养因子对视神经不全损伤后

长距离再生作用的研究

摘要

目的:探讨睫状神经营养因子(CiliaryNcurotrophicFactor,CNTF)对视神经(OpticNerve,ON)中度不全损伤后长距离再生和功能修复的作用,为临床救治提供实验依据。

方法:1.选用成年雌性Wistar大鼠,用无创血管夹于球后1.5mm钳夹ONl0秒,造成ON中度损伤,于伤后即时、伤后l、2、4和8周CNTF治疗组玻璃体腔内注射重组睫状神经营养因子(rhCNTF)2}lg,对照组注射等量双蒸水。分别在不同的时间(1、2、4、8和12周)应用光镜及电镜观察ON损伤后的组织病理学改变以及损伤远端不同距离的轴突数目及再生纤维。2.采用免疫组织化学技术检测GAFq3在受损ON轴突中的表达。3.应用HRP顺行示踪观察ON不全损伤后轴浆运输功能的恢复。4.应用F.VEP电生理检测ON不全损伤后神经传导功能。

结果:1.病理改变:伤后1.2周损伤区呈急性炎症反应,至4.12周出现胶质瘢痕,损伤远端轴突变性崩解,轴突变性随着存活时间延长及距损伤点距离增加而加重,轴突数目进行性减少,CNTF治疗组损伤远端变性程度明显轻于对照组,尚保存有相对较多的神经纤维。对照组仅在损伤点后2mm发现散在无髓鞘纤维,而治疗组于损伤点后远至8mm可见呈丛状新生的无髓鞘纤维。2.GAP-43表达:伤后l周,损伤近端GAP.43表达阳性,远端为阴性;第2周远端出现局灶性阳性反应:到伤后8、12周损伤远端至视交叉GAP.43表达达高峰,治疗组明显强于对照组(p<0.01)。3.HRP顺行示踪:伤后1-2周在损伤点后HRP顺染密度骤然下降,于上丘均未见HRP显色:第4周轴浆运输明显恢复,ON及上丘顺染密度逐渐增强至8周达高峰,对照组ON损伤远端顺染密度恢复至正常的12.87%,而治疗组至31.86%。两组间于ON损伤远端和上丘HRP顺染密度均有非常显著性差异0<O.01)。4.F.VEP变化:伤后l周,潜伏期两组基本恢复至损伤前水平。振幅恢复缓慢,于伤后1.2周治疗组与对照组无显著差异0>O.05):4周以后两组间差异非常显著(p<O.01),8周对照组恢复至损伤前的30.84%,而治疗组恢复至50.35%。

结论:1.CNTF能有效地促进中度ON不全损伤后长距离再生和功能恢复。并通过延缓神经组织进行性变性的进程,增强其再生反应能力以及促进轴浆运输功能的恢复而发挥作用。4

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2.CNTF单因子应用虽能促进ON再生,但其作用仍然有限。由于ON损伤与再生是多因素共同参与的一个复杂过程,研究各种因素的作用及其机制,全面认识ON损伤后再生的有利和不利因素,采取综合治疗手段,才会更有效地达到神经修复的目的。这也是今后我们研究的方向。关键词:视神经,不全损伤,CNTF,再生,GAP-43,HRP,F-VEP

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睫状神经营养因子对视神经不全损伤后

长距离再生作用的研究

前言

视神经(Opticnerve,ON)损伤修复与再生一直是神经生物领域研究的热点。尽管近20年许多研究证实通过周围神经移植视网膜神经节细胞(Retinalganglioncell,RGC)能够再生,并可经移植物到达靶区建立功能性突触【l。2’3“】,但迄今证明ON长距离再生均是采用ON完全性损伤——截断伤模型,并在周围神经移植的再生环境中,与临床多为ON挫伤的致伤特点存在较大差异,且周围神经移植尚不能应用于临床。目前临床上ON损伤仍无有效的治疗措施。因此对不完全性ON损伤后在原中枢神经环境中长距离再生和功能修复的研究显得更有临床应用价值和前景。近来有一些相关的研究报道较轻的ON不全损伤有短距离自发性再生现象【5l以及视功能有不同程度的恢复【6。。“引,但均未获得其在原损伤环境长距离再生的证据。那么ON不全损伤后是否能长距离再生?能否用神经营养因子促进ON再生纤维长距离生长,并于靶区建立有功能的突触联系?以及如何克服伤后不利的微环境,提供或营造一个有利再生的环境仍是目前尚待解决的问题。

既往的研究证实神经营养因子(NeurotrophicFactor,NTF)在促进轴突损伤后周围神经元和中枢神经元的存活和再生起了重要的作用。已发现20多种促进神经元存活和生长的营养因子。而在这些NTF中,睫状神经营养因子(CiliaryNeurotrophicFactor,CNTF)有重要的地位。许多研究证明CNTF有多种生物学效应。不但对多种神经元的存活有支持作用【9】,对RGCs也有保护作用【10。1“12】,有人认为周围神经诱发RGCs再生实质是由于CNTF的作用,且认为它是唯一能保护RGCs存活和促进再生双重作用的神经营养因子[13,14,15】。为此本研究选用CNTF作为促进因子,观察CNTF能否促进ON损伤后在原中枢神经环境中长距离再生和功能修复,为临床救治提供实验依据。6

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材料与方法

一、仪器和试剂

仪器:

1.便携式眼科手术显微镜:日本Olympus公司

2.大号无创血管夹:无锡医用器械厂

3.常规眼科显微手术器械:苏州明仁医疗器械公司

4.计时秒表:重庆仪表厂

5.精密电子天平JAl003:上海精科天平

6.隔水式电热恒温培养箱:上海市跃进医疗器械厂

7.电热鼓风干燥箱:CSl01.1EDN,重庆四达实验仪器有限公司

8.格兰仕23L机械型微波炉

9.石蜡切片机:LeicaRM2015,上海徕卡仪器有限公司

10.冰冻切片机:AS6200,Shandon公司

11.透射电镜:PhilpsTecnai10,荷兰制造

12.光学显微镜和照相显微镜:德国Leica公司

13.LeicaQWin图象分析系统

14.AVESS000全自动眼电生理仪:重庆康华公司

15.银针电极:重庆医药公司,改制

主要试剂:

1.速眠新:吉林农牧大学兽医研究所

2.多聚甲醛:北京化学试剂公司

3.25%戊二醛:四川华天科技实业有限公司

4.辣根过氧化物酶(HRP),sigma公司

5.四甲基联苯氨(TMB):gnlresco公司

6.钨酸钠2H20:北京化学试剂公司

7.rhCNTF:军科院范明教授惠赠

8.鼠抗鼠GAP.43单克隆抗体:sigma公司

9.多聚赖氨酸:sigma公司

lO.羊抗鼠SABC试剂盒:武汉博士德公司

11.DAB试剂盒:武汉博士德公司

二、实验动物及分组成年雌性Wistar大鼠120只,体重150.2009,由第三军医大学动物实验中心提

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供。随机分为CNTF治疗组和对照组各60只。并分为伤后l、2、4、8和12周5个孵阕点,两缀德眩阕点各12只动兹。其中5哭焉于零裁FIE染色及生长穗关蛋白(GrowthAssociatedProtein43,GAP.43)免疫组织纯学检测:5袋瘸子辣粳过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)顺行示踪;2只用于透射电镜观察;每只动物于损伤前、损伤即刻及处死前均检测闪光视觉诱发电位(Flashvisualevokedpotentials,F-VEP)。实验期阅,动物在闲一条锋下由第三军激大学西密送靛动凄实验孛。&疆养。

三、动物模型制作及绐药方式

1.模型制作:速眠新(O.5ml/kg)肌肉注射麻醉。犬鼠侧卧位,予显微镜下剪开外眦建及纛爨臻缝膜,分裹缝膜下缍织及球麓缝织,暴嚣ON,震曼毯纛管夹予蘧爱l,5rata钳夹ON10秒,造成ON中度损伤(前期研究表明钳夹5秒致轻廉损伤:钳夹大于20秒造成严重损伤)。避免损伤眼动脉,术厢滴抗菌素眼液,涂抗菌素眼膏。单眼(右限)损伤,术后双察大懿B曼底血液供应情况,确认无缺盘考纳入实验。

2.莼耪注射:动物繇酪届,蘑消毒焉翡10#l徽蠢攘遗器驳取药物,予太鬣疆球上方赤道部f躐角巩膜缘3mm)斜向后下方进针,予瞳孔直视下观察针尖避免损伤晶体。治疗组玻璃体腔内注射rheNTF2灶l(2牡g),对照组玻璃体腔内注射无菌双蒸水2雌。注瓣嚣重藤受援臻秘麴、寒嚣l、2,4窝8麓。

四、透射电镜观察

1.取材:动物麻醉后,开胸,经发心室插管至升主动脉,先用O.9%NS250ml后瘸0。5%多聚警醛+2.5%戊三醛250ml灞浚弱定l奎孵,取出ON棘本,每摄ON予距授伤点远端tmm至视交义前共9ram(熬个ON长约ll・12mm),平均分为三敬t每段3ram,浸于3%戊二醛4"C保存。

2.方法:l%锇酸后固定,环氧树月簿包埋,每段取中央lmm(三段分别为蹲凝伤点纛2mm、5mm、8ram),ON横行讶冀,透麓毫镜下瓣察。选取辐强放大疆率2900结掇像,每段标本随机摄像4张,计算ON损伤远端躐损伤点2mm、5ram、8ram横断颟单位面积(m矗)的髓鞘化(mAx)、无髓鞘(Ax)及变性链鞘纤维(dAx)数目及其占总轴突数基豹毙铡;闲辩裹倍放大蘩辜下褒察鼷损痿蠢不翳距离ON起徽续穆改交。

3.髓鞲化(mAx)、无髓鞘(Ax)及交瞧髓鞘轴突(dAx)韵识鄹标准㈣:

11髓鞘化轴突:髓鞘板层致密,轴浆透明,微锊、微丝排列撼齐

21无髓鞘辘突:无爨麟,辘浆透明。徽管、微熊摊列整齐,假可见囊泡

3)交毪靛鞘辘突:懿辚崩溃或紊氖,呈洋葱襻敬交,辘浆稀密,镦蓉、徽缝、线粒体等细胞器消失

五、GAP-43免疫组耋;i化学检测l,取秘:凌凌寒酚爨,秀魏,经表心室捶警至舞圭羲驻,兔瘸0.9%NS250ml嚣

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用4%多聚甲醛250ml灌注固定1小时,取出ON标本浸于4%多聚甲醛,石蜡包埋,ON纵行切片61am,接片于预先用多聚赖氨酸处理过的干燥玻片上,60"C烤箱烘干30分钟,于干燥处保存。阳性对照标本采用新生Wistar大鼠(生后3天)脑组织;阴性对照在免疫组织化学实验步骤中用0.01MPBS代替一抗GAP.43抗体;正常对照采用未损伤眼视神经标本,实验步骤完全相同。

2.免疫组织化学方法:

1)石蜡切片脱蜡至水:二甲苯I5分钟,二甲苯II5分钟,无水乙醇1分钟,95%乙醇1分钟,80%乙醇1分钟,蒸馏水洗;

2)3%H202室温孵育20分钟,蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟:

3)切片放入装有枸橼酸钠缓冲液的容器中于微波炉800瓦加热4分钟,300瓦加热10分钟,再自然冷却,蒸馏水冲洗,PBS洗3分钟×3次;

4)滴加封闭液(正常血清),室温孵育20分钟,倾去,不洗;

5)滴加单抗GAP.43(1:200),4"C孵育过夜,PBS冲洗3分钟×3次;

6)滴加生物素标记羊抗小鼠IgG,37'(2孵育30分钟,PBS冲洗3分钟×3次i7)滴加ABC复合物.37"(2孵育30分钟,PBS冲洗3分钟×3次

81

91DAB显色荆显色,在显微镜下控制反应时间,自来水充分冲洗180%乙醇1分钟,95%乙醇1分钟,无水乙醇I1分钟,无水乙醇II1分钟,二甲苯I1分钟,二甲苯111分钟,中性树胶封片。

10)所有切片免疫组织化学检测均在相同条件下完成。每组每时间点各5张切片在低倍镜下选定损伤远端2mm位置,采用图像自动分析系统,在统一放大倍数(×200)下,随机检测3个区域(150X2001』m')平均光密度(AOD)。每标本数据取其均值。

六、HRP烦行示踪

1.取材:动物损伤眼玻璃体腔内注射33%HRPl01al存活72小时后,麻醉下开胸,经左心室插管至升主动脉,先用0.9%NS250ml后用O.5%多聚甲醛+2.5%戊二醛250ml灌注固定1小时,取出ON及中脑放入30%蔗糖后固定液中4"C过夜,次日冰冻切片,0N纵切201xm,每标本间隔3片取1片,共取3片;中脑冠状切片501m,间隔5片取1片,共取3片,接片于5%蔗糖磷酸缓冲液中,按四甲基联苯胺一钨酸铀法(TMB—st)[171漂染成色。

2.方法:

1)混合孵育液配制:溶液A:TMB7mg+丙酮0.5ml+无水酒精lm!

溶液B:钨酸钠2H20lg+蒸馏水47m1+0.2mol磷酸缓冲液

(PH5.0—5.4)50ml+tN

9HCI1.5ml

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2)切片在蒸馏水中速洗2—3次:

3)入A、B混合液温孵1小时(15-20"C):反应从加入O.3%H2020.7ml开始,每10分钟再加0.7ml,直至反应结束:

4)l:4稀释0.2mol磷酸缓冲液(PH5.0.5.4)洗3.4次,每次2-3分钟:

5)在预先涂有明胶液并干燥后的玻片上贴片,二甲苯透明,中性树脂封片:

6)在低倍镜下选定损伤远端2mm及上丘顶部位置,采用图像自动分析系统,在统一放大倍数(×200)下,以灰度识别HRP顺染纤维,检测ON(250×3009m2)及上丘(150x2509rn2)HRP顺染面密度(AD),每标本数据取三张切片所测AD的平均值。正常值取自来损伤眼ON顺行示踪结果。

七、F-VEP检测

采用AVES8000自动视觉电生理系统,动物麻醉后,暗适应15分钟.用特制支架固定,采用银针电极,记录电极插入大鼠枕骨粗隆骨膜下,参考电极插入两眼正中皮下,地电极插入耳尖皮下。采用全视野刺激球白色闪光刺激,背景无色,通频带低频为1Hz,高频为100Hz,单刺激,频率为2Hz,闪光强度为3.556e~3cd.s/m2,放大倍数为20000倍,每次采样时间为250ms,波形叠加50次,记录稳定波形,每只动物记录三次,间隔lO分钟。每只动物潜伏期5a(ms)及振幅5a-5b(pv)数据取三次的平均值。

八、统计学处理

采用SPSSll.0软件中t检验进行统计学分析,结果以均数±标准差(i±S)表示。P<O.05为相差显著,p<O.叭为相差非常显著。

一、病理形态学改变

1.1光镜变化果

损伤1.2周损伤区轴突、胶质细胞胞浆疏松、肿胀星空泡样变(图片1,图片2),淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞浸润,血管扩张,面远端组织变性、轴突崩解不明显。4—12周损伤区出现胶质瘢痕及毛细血管增生(图片3),各类炎性细胞减少,损伤远端星形胶质细胞增生,吞噬细胞胞浆空化,轴突变性崩解,轴突变性随着存活时间延长而加重,而CNTF治疗组远端神经组织变性明显轻于对照组。(图片4,图片5)。

1.2电镜超微结构变化及各类型轴突数耳比例

正常成年大鼠ON横切面由被聚合成束的髓鞘化纤维和其周围包绕的星形胶质细胞所组成,神经纤维由隔膜分成束状,轴突紧密排列,轴突内可见线粒体和排列整齐

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的微管微丝,轴浆透明,髓鞘板层致密,电子密度一致(图片6)。新生鼠(生后11天)发育中的ON由大量无髓鞘纤维(无髓鞘,轴浆透明,微管、微丝排列整齐,偶可见囊泡)及部分髓鞘化纤维组成(图片7)。

损伤后第1.2周,损伤远端部分髓鞘变性,板层结构分裂呈洋葱样改变或变薄(图片8),线粒体肿胀,空化,微丝、微管等细胞器退化消失,可见局灶性坏死溶解区。伤后第4周,大部分髓鞘变性,髓鞘改变主见于大直径纤维,轴突明显减少,排列紊乱,变性轴突部分崩解,星形胶质细胞及胶质增生(图片9),吞噬细胞内较多脂质空泡。伤后8.12周,轴突变性程度明显加重,多数轴突变性,崩解、消失,仅有少量细小纤维呈岛状分布,其间大量间质充填及脂质空泡,轴突数目随着存活时间延长及距损伤点距离增加进行性减少(图片10,图片1l,图片12),变性纤维是髓鞘化和无髓鞘轴突的两倍。CNTF治疗组损伤远端变性程度明显轻于对照组,尚保存有相对较多的神经纤维(见表1)。于伤后4.12周,对照组在损伤点后2mm发现稀少再生的无髓鞘纤维(图片13,图片14),占残存纤维总数的0.20.3.50%;而治疗组8.12周于损伤点后直至远端8mm均发现呈丛状新生的无髓鞘纤维(图片15,图片16),占4.20.7.43%。再生纤维多位于星形胶质细胞或有髓纤维周围.为细纤维。

薯磊然而可警氅1F丽—等等

表l大鼠视神经损伤远端不同距离无髓鞘(Ax)、髓鞘化(mAx)及变性髓鞘纤维(dAx)例

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12周

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63.46

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注:组别括号内数字为鼠数

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二、视神经GAP-43表达变化

视神经损伤后l周,治疗组及对照组损伤近端GAP-43阳性表达。损伤远端呈阴性;损伤后2周,损伤近端阳性减弱,损伤远端呈局灶性阳性表达,伤后4周两组间损伤远端GAP-43表达出现显著性差异(p<O.05)(图片17,图片18)。至伤后8、12周,治疗组损伤近、远端阳性表达显著增强,远端达视交叉(图片19,图片20),而对照组阳性反应明显弱于治疗组(图片21),两组间差异非常显著p<O.01)(表2,图1)。正常对照(未损伤眼ON)GAP.43表达阴性。

表2GAP-43在视神经损伤远端2mm表达(AOD)

(i±s)

注:组间比较P<0.05差异显著,P<0.01差异非常显著

O-6

0.5

室o,4V

絮o。

南o-2

。0.1

正常对照l周2周

伤后时问

4周8周12周

图l

GAP-43在视神经损伤远端表达变化

三、HRP顺行示踪定量分析

正常ON显示密集均匀纵行排列呈蓝色的轴突(图片22),ON顺染密度自视乳头—视交叉呈递减性,上丘显示呈蓝色的球形终末膨体和串珠或沙砾样神经终末(图片23)。

损伤后1.2周,在损伤点远端HRP顺染密度骤然下降(图片24),第1周损伤远端治疗组与对照组无显著性差异(p0.05);伤后2周治疗组轴浆运输开始恢复;伤后4周。两组损伤远端轴浆运输恢复较明显,并逐渐增强于第8用达高峰(图片25,图片

12

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26),对照组恢复至正常的12.87%,而治疗组恢复至31.86%;伤后12周较8周HRP顺染密度有所下降。损伤远端HRP显色分布不均匀,扭曲、间断或局部膨胀。ON损伤远端HRP顺染密度于2.12周两组间均有非常显著性差异(p<o.oD。(表3,图2)

在1.2周于上丘均未见HRP显色;伤后4周,上丘可见较弱的HRP显色:至8周HRP顺染密度达高峰(图片27,图片28)。上丘HRP顺染密度于第4-12周两组间均有非常显著性差异(p<O.01)。(表4,图3)

表3视神经损伤远端2ramHRP顺染面密度(%)

(;±S)

组别

治疗组对照组t值

鼠数

55

正常

72.52±8.9476.93士7.90

l周

2.48士o.51

2.37士0.60

0.303

2周4周

6,16士1.662.87±0.65

4.1050003

8周

23.1l士3.54

12周

1846±442

17.35士3.4l3.28±2,494.832

0.001

9.90士1,98

7,146

0.000

8.9l士2.4I

4.2380.003

P值0.769

注:组问比较P<0.01差异非常显著

臻氍怠

靶露

∞∞%∞舳∞∞加∞0

纛囊垂l荔纂菱i囊i!:l

正常

~~‘■‘

l同

2周

4周

8局t2周

伤后时问

围2视神经损伤远端HRP顺染密度变化

:墨!圭垦坚些璺銎耍奎塞!兰!

鼠数

治疗组

55

!i圭!!

12周

9.00±2.28

5.04±0.87

4.525

正常4周8周

65.66±8.39

62.88±8.18

8.18±2.19

3.13±0。93

4.744

11.76±2.595.78±l。49

4.457

对照组t值

1堡

!:!坠!:!!!!:!!!

注:组间比较P<0.们差异非常显著。伤后l、2周上丘未见HRP显色。

第三军医大学硕士学位论文

一#一o《寰鼙皇}i口叫

豁∞朗鞠锵善l∞m垂

正常

l周

2周

{周

8阐12周

蠕詹时间

图3视栉经损伤后上妊HRP顺染密度炎化

四、F-VEP变化

视神经损伤篇即刻,F-VEP波形凡近熄灭,潜伏期明照延长,振幅照箸降低(图S,圉

&。伤君l躅,潜茯鬏嚣缀基本获复至攘痿嚣拳乎,每援费兹魄鞍无显著缝熬异(芦>O+05),组闻阮较无显著性麓异岱>O.G5)(袋5)。振幅恢复缓慢,铸麓l-2周治疗缌与对照组比较无显著差异p>O.05);4周以后两组间差异非常显著p<O.01)(表6,图4)。8瘸辩照缀恢复至授伤翦豹30.84%(强7),磷治疗组恢复黧50,35%(甄8)。

袭5治疗组与对照组F-VEP潜伏期(Sa。ms)变化

组别

(i±S)

8周

65.36圭7。争461.7l士3.03

1.12l

鼠数

1212

攒伤前

6e、82±s,61

6l12±7.55

损伤即时1周2周4周

63.97±辛.0664.19±S.87

0.064

12_|掰

6。.1毒女8,{76,.23圭8+06

O.719

避疗缀

对照缀t德

91.90主11.2368。75±1085*64,29主8.拿489.22士10.0568.65±lQ.58’6603±9。02

0.0230.982

0.4720641

P值

0,9500.274

4瓣

注;+治疗组傍嚣l弱与损伤蔫毙较:t=1。982,P=0+060;4;瓣照组揍菇l矮与损签兹魄较

辟2.004:P=0.057

鎏!.望堡垒兰登墨墨兰!!燕坚竺竺垫::旦篓些

缀期

!i圭曼L。

12璃

3037±6.74

19

藏数

1212

捎伤敖

64.38±1l34

6拄.32±962

按荡帮对

530±I.73

l墒

1639士4.65

1587土5.23

2罔4周8厢

2008±5.1,28.35±6.92

16.57士5.20

!.6598。11l

治疗组

对照组

32.47±8.46

21.07土5.14

3.969

653士1.84

20.23士4.33

3.445

20±4,83

4.660

t壤

O.25l

P缓0.804

0.007,0,∞l0.0鹳

注:组间比较P<0.Ol差异非常显著

14

第三军医大学硕士学位论文

100

80

60

室40

20

损伤前损伤卸时

1周

2周

4周8周

12周

伤后时间

图4视神经损伤后F-VEP振幅变化

图5损伤前正常F-VEP波形

圉6损伤鄞刻F-VEP波形

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